藥毒所103年度

36 試 壹 建立微生物農藥菌種鑑定技術─枯草桿菌及液化澱粉芽孢桿菌 「使用高安全性的微生物製劑」以 及「減少高毒性農藥的使用」為農藥使用 之潮流。為健全我國農藥的管理，以及加 速微生物製劑之商品化，亟待補強微生物 製劑的菌種鑑定技術及品系鑑定技術。基 因檢測是快速且準確的微生物檢驗技術， 我們採用階段式的基因檢測來進行微生物 鑑定，第一階段使用 16S rDNA 定序比對 菌種，但枯草桿菌及液化澱粉芽孢桿菌 無法以 16S rRNA 定序區分，第二階段以 gyr A 基因定序可區分枯草桿菌及液化澱 粉芽孢桿菌，第三階段以 UP-PCR 技術可 以區分不同的液化澱粉芽孢桿菌亞群，而 第四階段的逢機增幅多型性 DNA (RAPD) 技術則可區分亞群內之不同品系 ( 表 9) 。 利用結合螢光偵測的方式，可更快速且準 確的鑑別不同的菌株種類及品系。這些基 因檢測技術可以應用於市售枯草桿菌與液 化澱粉芽孢桿菌產品的查驗，提供資料予 農藥主管單位以利市場管理，同時解決各 界在菌株品系鑑別上的困難，以加速研發 產品的登記，確保農業生產安全，促進植 物保護產業之發展。 表 9. 表中列出四個階段的菌株身分鑑定程序：前兩階段利用聚合酶連鎖反應 (PCR) 產物 之定序比對，能夠清楚確認菌種；而後兩階段則利用 PCR 進行鑑定出的相同菌種 間，不同品系的區分。 Step Method Identification level Main purpose 1 16S rRNA sequence alignment To genus (e.g. Bacillus ) Exclude bacteria contaminations 2 gyr A gene sequence alignment To species (e.g. Bacillus amyloliquefaciens ) Confirmation of bacteria species 3 Universal primed PCR To the subgroups of a species Subgrouping specific bacteria species 4 Random Amplified Polymorphic DNA To specific strains of a species Identify specific bacteria strains