藥毒所100年度

76 2011 A nnual R eport 生化感測於污染檢驗之利用研究 已 完 成 阿 拉 伯 芥 5 種 重 要 酵 素： glutamine synthetase （ GS ） 、 ace tol ac t a t esynthase （ ALS ）、 ketolacidreductoisomerase （ KARI ）、 p - hyd r opheny l py r uva t ed i oxygena s e （ H P P D ） 及 d i h y d r o x y a c i d dehydratase （ DHAD ） 等之基因選 殖，並進行核酸定序與確證，各 cDNA 長度為 1062 、 2013 、 1776 、 1341 及 1776 bp 。另已構築 GS 、 ALS 、 KARI 、 HPPD 及 DHAD 等 5 種轉基因，以 sal I 及 Not I 限制 酶 切接於 pET 28a （ + ） 載體， 以熱休克技術，將含 5 種基因所構築之 載體，轉殖於大腸桿菌 BL21 菌株。利 用 GS 、 ALS 及 HPPD 之 glufosinate 、 Imazapyr 及 sulcotrione 等抑制劑為對照 組，分別測定酵素活性 I 50 值為 5.2 、 3.3 及 4.3 μM （ 圖 58 ）。目前 15 處電 鍍工廠污水檢體中有 6 個檢體對 HPPD 酵 素 具 50% 以 上 之 抑 制 現 象 （ 圖 59 ）。 圖 58. 利用重組大腸桿菌之 acetolactate synthase （ ALS ） 融合蛋白檢測依滅草 （ imazapyr ） 的 抑制活性。