藥毒所99年報

2010 Annual Report 19 壹 ． 試驗研究 人類醣皮質類固醇荷爾蒙受體反應基因與螢光報導基因轉染細胞之 建構選殖 本計畫乃建立經由人類醣皮質類固 醇受體 (glucocorticoid receptor, GR) 結合 反應元素 (responsive elements) 表現綠螢 光 蛋 白 (green fluorescence protein, GFP) 之體外 (in vitro ) 報導基因檢測系統，以 供快速篩檢具醣皮質類固醇干擾作用之 藥物，作為農藥安全性評估之參考。以 西方墨點法選出具有較高 GR 表現量，較 低雄激素受體 ( androgen receptor, AR ) 及黃體素受體 ( progesterone receptor, PR ) 表現量的人類肺癌細胞株 A549 ， 將其為標的同時轉染具全長 GR α 片段 ( pcDNAGR α ) 及含有反應元素片段、 啟動子及 GFP 報導基因 (pMMTV-GFP) 之兩表現載體後，再以 dexamethasone (GR 促進劑 ) 及 RU-486 (GR 拮抗劑 ) 處 理轉染細胞，其結果於螢光顯微鏡及流 氏細胞儀檢測下均能有活化或抑制螢光 的表現 ( 圖 13.) ，且具劑量反應關係 ( 圖 14.) ，證明該系統之可運作性。 圖 12. A ：對照組中第 9.5 天胚胎培養 48 小時後，免疫染色未有環化 抗體反應； B ：雌素二 醇誘發大鼠胚胎環化 抗體反應； C 與 D ：環化 促進劑誘發大鼠胚胎環化 抗體 顯著反應。 A. DMSO, 400 × C. Rhodamine B 1.55 E-5M, 400 × B. E2 1.23 E-4M, 400 × D. Rhodamine B 7.75 E-6M, 400 ×