藥毒所99年報

2010 Annual Report 43 壹 ． 試驗研究 株 EPSPS 的拷貝數相同，抗性繖花 龍吐株 EPSPS 的拷貝數並未較感性 株多，推測繖花龍吐株對嘉磷塞之抗 性與標的酵素的拷貝數無明顯相關 性。 (c) EPSPS 之北方氏轉漬 (northern blot) 分析：以繖花龍吐株噴施次致死 劑量 0.615 kg ai ha -1 嘉磷塞，於施藥 後 3 、 7 及 10 日採取 0.2 g 初生葉， 萃取總 RNA ，亦以抗性繖花龍吐株 EPSPS-DIG 為核酸探針，進行雜合 反應。結果施藥後 3 日，抗及感性繖 花龍吐株 EPSPS RNA 表現量皆略減 少，但至 7 及 10 日後感性繖花龍吐 株 EPSPS RNA 表現量反而略增加， 可能為 EPSPS 作用受抑制後之自身回 饋調控之現象，抗及感性繖花龍吐株 EPSPS RNA 表現量並無顯著差異。 (d) EPSPS 之西方氏轉漬 (Western blot) 分析：以次致死劑量 0.615 kg ai ha -1 嘉磷塞施藥後 0 、 3 及 5 日，萃取抗、 感性繖花龍吐株約 0.5 g 初生葉的總 蛋白質，經 EPSPS 抗體的雜合反應， 結果顯示於約 47 kDa 處有呈色條帶， 施藥後抗、感性繖花龍吐株 EPSPS 含 量皆略減少，但於抗及感性繖花龍吐 株之間無明顯差異，以感性株出現較 47 kDa 略長的蛋白條帶，可能為 pre- EPSPS 於細胞質中被嘉磷塞鍵結，未 以 mature EPSPS 進入葉綠體之故。 (e) 抗及感性繖花龍吐株 EPSPS 酵素 活性分析：感性繖花龍吐株 EPSPS 酵素於未施嘉磷塞前或低於 0.1 mM 嘉磷塞，其活性皆明顯高於抗性株 EPSPS 活性，可能抗性株 EPSPS 於 107 proline 改變為 serine ，不僅降低 與嘉磷塞之親和力，亦影響其與受質 PEP 的鍵結，因此活性反而低於感性 株者。但嘉磷塞濃度高於 0.01 mM ， 感性株 EPSPS 活性開始降低，至 0.1 mM 大幅受抑制，嘉磷塞濃度低於 0.01 mM 是時，對抗性株 EPSPS 活性 無明顯影響， 0.5-10 mM 嘉磷塞處理 後，活性皆較感性株者高 ( 圖 34.) 。 圖 34. 抗及感性繖花龍吐珠 EPSPS 酵素於不同 劑量嘉磷塞處理後之活性比較。利用孔 雀石綠法，檢測磷酸根離子釋出量估算 EPSPS 酵素活性。