藥毒所99年報

48 多功能微生物農藥之開發—內生菌之鑑定與開發 本計畫主要工作項目為植物內生細 菌的分離與篩選、建立植物內生細菌的 定殖分析方法、建立 real time PCR 定量 植物內生細菌的方法與進行植物內生細 菌的鑑定及分類 ( 圖 38.) 。篩選具有抑菌 植物病害潛力的菌株，進一步利用菌株 在植物內生的特性，開發有效之內生細 菌植物保護製劑，以提升農業經濟效益。 今年度已完成的主要成果如下：已採集 中部地區 3 處作物並篩選植物內生菌， 從拖鞋蘭的花梗分離出 2 株 Bacillus sp. ， 對於蘭花黃葉病與水稻稻熱病皆具有抑 菌效果。已利用 Biolog 菌種鑑定系統與 16SrRNA 及 gyr B 基因進行序列分析，菌 種鑑定為 Bacillus amyloliquefaciens 液化 澱粉芽孢桿菌。已建立植物內生細菌的 2 種定殖分析方法，例如培養法與 real time PCR 定量法。初步建立 real time PCR 定 量植物內生細菌的方法。利用 gyr A 基 因，設計專一性高的引子，完成 real time PCR 分析並定量植物內生細菌。另外， 完成 GFP 綠螢光蛋白的基因轉殖試驗， 可以成功表現綠螢光，將有利於植物內 生細菌的內生定殖位置與數量等相關研 究，目前仍進行組織切片的觀察，期能 儘速建立 GFP 共軛螢光活體觀察的技術 平臺。 圖 38. 植物內生細菌的分離。 具產業應用價值本土性生物農藥之開發量產和應用 篩出對疫病菌具抑制作用之標的木 黴菌菌株 (T212) ，除進行菌株基本生化 及生物特性資料建立工作外 ( 圖 39.) ，亦 建行 18s 及 ITS 定序工作，並進行對甜椒 疫病之防治試驗。自不同採樣點分離到 54 株木黴菌，發現有一菌株菌落顏色淡 白，異於一般木黴菌，但進行生物檢定 發現該株對重要之作物病原 Fusarium sp. 及 Phytophthora sp. 抑制作用不佳。以香 米與蓬萊米稻榖進行之產孢比較，發現 標的木黴菌菌株在此兩不同品種稻榖上 產孢無差異，稻榖與水之比例以 1 ： 2 為 佳。標的木黴菌菌株己純培養提供進行 毒理資料建立中。