藥毒所101年度

2012 Annual Report 36 細菌類生物農藥之開發 蘇力菌樣品的採集來源，除了原有 的西部沿海地區如台中、彰化、嘉義、 台南及屏東等，還包括東部沿海的台東、 花蓮及離島的蘭嶼地區，共 14 個採集點 ( 包括大安海水浴場、芳苑濕地、彰濱工 業區、好美寮、北門、雙春、林邊、三 仙台、牛山、野銀、朗島、東清灣、紅 頭、椰油交界處等 ) ，加總共計 120 個樣 品。樣品透過熱處理及位相差光學顯微 鏡進行殺蟲結晶蛋白 (insecticidal crystal protein, ICP) 形態的鑑定，結果顯示篩選 得到的 24 株分離株殺蟲結晶蛋白皆呈現 典型的雙金字塔形 (bipyramid) 。 24 株分離 株透過聚合 連鎖反應 (polymerase chain reaction, PCR) 進行基因型分類鑑定，分別 以針對防治鱗翅目、鞘翅目和雙翅目之 結晶蛋白基因所設計之引子進行鑑定， 結果有 21 株含防治鱗翅目昆蟲之 cry1 型 殺蟲結晶基因， 3 株則不含防治鱗翅目、 鞘翅目和雙翅目之殺蟲結晶蛋白基因。 細區分 cry1 殺蟲基因所用之引子結果顯 示， cry1 型基因共有 7 種 cry1 型基因組 合， 11 株為「 1Ab, 1Ac, 1D, 1E 」型， 4 株 為「 1Aa, 1Ab, 1C, 1D 」型， 2 株為「 1Aa, 1Ab, 1Ac 」型， 2 株為「 1Aa, 1Ac 」型， 1 株為「 1 Ac 」型， 1 株為「 1Ac, 1C 」型， 3 株為「 ND 」型 ( 圖 34) 。沿海地區可篩 獲蘇力菌的樣品數及該樣品酸鹼值與電導 度值的分布顯示，可篩獲蘇力菌之樣品酸 鹼值皆落在 7.5~8.9 ， 16 個可篩獲蘇力菌 之樣品當中，有 14 個樣品的電導度值是 分布在高鹽至極高鹽。擬尺蠖生物活性試 驗顯示，「 1Ab, 1Ac, 1D, 1E 」型菌株在總 蛋白質濃度 10 ppm 處理下具 95% 的致死 率，「 ND 」型菌株在總蛋白質濃度 1000 ppm 處理下，僅有 6~13% 的致死率。 自台灣中部 6 採集點，共蒐集 8 批 土樣，進行芽孢桿菌之篩選分離，經過 初步之耐熱篩選，共篩選出 76 株耐熱 芽孢桿菌菌株，菌株編號為 MR01~03 、 WR01~16 、 NT01-01~16 、 NT02-01~10 、 NT03-01~09 、 NT04-01~05 、 NT05- 01~05 、 NT06-01~09 及 NT07-01~03 ；自土 樣分離之芽孢桿菌逐批進行與植物病原真 菌之對峙試驗，完成篩選 76 株耐熱芽孢 桿菌與水稻紋枯病 ( Rhizoctonia solani J. G. Kuhn ， rRS) 、草莓炭疽病 ( Colletotrichum gloeosporioides ， Cg01) 、蘭花黃葉病 ( Fusarium solani ， Fs-ama) 、水稻胡麻葉 枯病 ( Bipolaris oryzae ， Bo) 、香蕉黃葉病 ( Fusarium oxysporum f. sp. cubense ， Foc- ba02) 、長豇豆萎凋病 ( Fusarium oxysporum f. sp. tracheiphilum. ， FS01) 、番茄萎凋 病 ( Fusarium oxysporum f. sp. Lycopersici ， fol33) 之拮抗試驗，篩選出 17 株對於此七 種植物病原真菌具有良好抑制效果之芽 孢桿菌 ( 表 10) ，並完成抗生基因 (iturin A 及 surfactin) 之確認及初步之菌種鑑定 (16s