藥毒所101年度

壹 試 57 活 72 小時，將前述供試蟲移入健株， 結果「 1.9 ml 糖水與 0.1 ml 菌液混合 液」的白邊大葉蟬再存活 9 日，而供應 「 0.5 ml 糖水與 1.5 ml 菌液混合液」者 全數在 18 小時後死亡。以室內飼育之 5 隻白邊大葉蟬成蟲，進行 1 次自葡萄罹 病株獲菌的傳播試驗後，其中 3 隻供試 蟲以引子對 RST31/RST33 及 XF2542-L/ XF2542-R 進行 PCR 反應以檢測帶菌情 形，結果皆為正反應，供試葡萄健株於 試驗後葉片落盡，擬於新葉長出後再行 檢測。另完成 2 次自模擬取食環境獲菌 的傳播試驗，供試的白邊大葉蟬 5 隻檢 測帶菌情形皆為負反應，表示此方法可 提供供試昆蟲取食，但尚無法確認可使 供試昆蟲獲菌。 二 、 粉 蝨 傳 播 瓜 類 褪 綠 黃 化 病 毒 (CCYV) 特性之探討 本年度自 6 縣 8 鄉鎮採集疑似感 染瓜類褪綠黃化病毒 (Cucurbit chlorotic yellows virus ， CCYV) 的罹病植株和銀 葉粉蝨 ( Bemisia argentifolii Bellows ＆ Perring) 成蟲，以 RT-PCR 檢測其罹病 率及帶毒情形。共採集 1612 個樣本， 有 570 個樣本感染 CCYV ，其罹病率為 35.4% ，其中桃園縣觀音鄉之西瓜樣本 並未檢出感染 CCYV 。自田間收集 477 隻銀葉粉蝨成蟲，單隻檢測粉蝨僅測 得 95 隻 (19.9%) 帶毒 CCYV 。本年度 CCYV 植株罹病率與粉蝨帶毒率皆有減 緩的趨勢。此外，銀葉粉蝨獲毒 CCYV 其保毒時間試驗，粉蝨獲毒 48 hr 後粉 蝨帶毒率為 90% ，第 3 天、 6 天、 9 天 及 12 天後，粉蝨帶毒率分別為 80% 、 45% 、 30% 、 5% 。此結果顯示，粉蝨經 48 hr 獲毒後，直至第 12 天，粉蝨體內 仍保有病毒。 侷限導管細菌快速診斷技術之開發與應用 本研究以恆溫環形核酸增幅法 (Loop-mediated Isothermal Amplification) 具有高敏感性、高專一性以及容易操作 的特性，應用於侷限導管細菌快速診斷 技術之開發。根據葡萄皮爾斯病菌的基 因片段 (XF2542) 及梨葉緣焦枯病菌的 專一性基因片段作為目標基因，設計恆 溫環形核酸增幅法專用的引子組。初步 篩選結果有兩組引子組可以應用於葡萄 皮爾斯病菌的偵測，另有一組引子組適 用於梨葉緣焦枯病菌。為了確認此新技 術之敏感性與專一性符合診斷之需求， 而與傳統 PCR 進行比較敏感性測試。初 步結果顯示恆溫環形核酸增幅法之敏感 度可達 200 fg ，略優於 PCR 之敏感性。 以葡萄皮爾斯病罹病株、帶菌媒介昆蟲 以及確認帶菌的寄主植物來進行測試， 結果都能得到正反應，確認恆溫環形核