藥毒所96年度

壹貳 96年參肆 2007 Annual Report 除草劑藥害分子免疫分析技術之研發嘉磷塞在國內為常使用的除草劑之一，目前主要檢測方法大多以 HPLC 為主，但耗時且昂貴。本實驗主要自備產生嘉磷塞之特異性多株抗體，研發製作快速篩選試劑檢驗嘉磷塞之殘留。目前針對從植物體中萃取嘉磷塞分子。進行酵素連結免疫分析 (ELISA) 。利用從植物體中萃取出嘉磷塞，分別以 BSA 和 mcKLH 為載體蛋白，利用 GA 法螯合獲得嘉磷塞特異性分子結構的接合抗原。予免疫紐西蘭白兔，分別獲得 BSA ， mcKLH ， glyphosate-BSA 和 glyphosate-mcKLH 四種多株抗體，之後續進行間接 ELISA 檢測植物體中萃取出嘉磷塞殘留量之研究 ( 圖 17.) 。結果顯示檢測水體及植物體嘉磷塞還是必須經過萃取、純化及濃縮過程，才可經由多株抗體製備以間接型 ELISA 方式偵測 50 ppm 。其靈敏度比商業套組單株抗體以競爭型 ELISA 方式偵測 5 ppb ，相差 10,000 倍。在商業套組測試中，在檢測水方面經萃取及純化，但可以不須經過濃縮過程，直接可進行 ELISA 測試，而植物體則必須濃縮，在 ELISA 檢測過程中，才不至於導致背景值過高。商業套組由單株抗體製，其靈敏度及專一性還是比多株抗體佳。但也由於所偵測形式不同 ( 單株抗體使用競爭型 ELISA ，多株抗體使用間接型 ELISA) ，在準備抗原的披覆上也會有所不同，導至於在多株抗體檢測流程上還是會比單株抗體檢測流程繁雜之缺點。 0 1 2 3 4 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 mc-KLH 未噴藥之植物體吸光值 (405nm) CK 0 1 2 3 4 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 mc-KLH-80X 年年春處理第 4 天之植物體吸光值 (405nm) 第 4 天 0 1 2 3 4 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X 1.5 2 2.5 3 3.5 mc-KLH-80X 年年春處理第 7 天之植物體吸光值 (405nm) 第 7 天 0 1 2 3 4 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS BSA-G BSA- ＊ KLH- ＊ CK PBS 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 10X 50X 100X 200X 500X 1000X 2000X mc-KLH-80X 年年春處理第 14 天之植物體吸光值 (405nm) 第 14 天圖 17. 大花咸豐草經 80X 年年春噴施後第 4 、 7 及第 14 天之植物體經萃取純化及濃縮，之後以自備多株抗體進行間接型 ELISA 測試之結果。