藥毒所96年度

7 2007 Annual Report 利用桿狀病毒為載體以擬尺蠖幼蟲微生物反應器生產豬熱緊迫蛋白 目前已利用細胞轉染技術，將 pAcP10Hsp70 質體 DNA 與直線性 AcRP23.Lac 病毒 DNA 進行同源性重 組，於 Sf21 昆蟲細胞產生含 Hsp70 基 因的重組病毒 vAcP10Hsp70 ，並已進行 三次的 plaque assay 篩選，以取得穩定 的重組病毒 vAcP10Hsp70 。該病毒感 染 Sf21 昆蟲細胞後，以西方點墨法可 偵測該 Hsp70 蛋白質的表現。依不同之 m.o.i.=1,5,10 進行偵測該 Hsp70 蛋白質 於昆蟲細胞中的表現，結果以 m.o.i.=5 於感染後 72-96 小時 Hsp70 蛋白質的表 現最佳 ( 圖 29.) 。進一步將以 Ni-NTA 親 和性進行純化，初步結果發現純化之回 收率不好，擬因血清干擾造成，為改善 此現象將改用無血清培養基。並將純化 後的 Hsp70 蛋白質進行活性測試，初步 結果顯示此以 vAcP10Hsp70 重組病毒所 表現之 Hsp70 蛋白質具有活性。 圖 29. 以 m.o.i.=5 於不同感染時間偵測 該 Hsp70 蛋白質於昆蟲細胞中 的表現。 Lane 1~6 ：為感染後 12, 24, 48, 72, 96 和 120 h 的細胞溶解液 (cell lysate) 。 M ：蛋白質標誌，由上而下分別 是 209, 130, 85, 55 和 40 kDa 。 C ：陰性對照組。 P ：陽性對照 組。 含胰蛋白脢抑制劑基因重組核多角體病毒之開發 當四齡初擬尺蠖處理 1x106 PIBs /ml 的 vAcP10SP 、 vAcP90SP 和野生型 AcMNPV ，其 LT 50 分別為 130.4 、 134.5 和 168.4 小時。當三齡初甜菜夜蛾及三 齡初斜紋夜蛾處理 1x106 PIBs /ml 的 vAcP10SP 、 vAcP90SP 時其 LT 50 亦被縮 短。該病毒感染 Sf21 昆蟲細胞後，以 西方點墨法可偵測該 sporamin 蛋白質的 表現。結果以 m.o.i.=5 於感染後 48-72 小時 sporamin 蛋白質的表現量最高 ( 圖 30.) 。