藥毒所97年度

0 2008 Annual Report 基改植物對環境生態之影響調查技術之研究 1. 96~97 年自農試所隔離試驗田中種植基 因改造與非基因改造馬鈴薯土壤中，共 收集到 174 株 Kan R 菌。其中有 163 株 質體 DNA 含有 nptII 基因（ 721 bp ） （比例 93.7% ），皆不含 932 bp 。 2. 以兩株卡那黴素感性菌（ K a n S ） Arthrobacter globiformis （ BCRC 14636 ） 及 Sporosarcina ureae （ BCRC 10776 ） 為受體細菌於濾膜上進行抗藥性基因 移轉。以基改木瓜及基改馬鈴薯含抗 藥性基因片段為供體 DNA ，經 24 小時 培養無基因水平移轉發生（低於 1.1 × 10 -11 ）。表示土壤中之 Kan S 菌不易與基 改植物抗藥性基因發生基因水平移轉。 3. 97 年 1~10 月收集隔離試驗田排放水共 23 個樣品（農試所外排放水 11 個，進 入試驗田前 4 個，試驗田出口 4 個，排 放水沈澱池 4 個），以標準 PCR 分析， 23 個樣品無基改馬鈴薯（ 180 bp ）及基 改水稻（ 280 bp ）之轉基因片段。其中 有 9 個樣品含有基改木瓜（ 398 bp ）之 片段，但皆低於同步定量 PCR 偵測極限 （ 0.24 ng/mL ）。 4. 以 M e d i u m 5 1 0 、 S O B - A c i d 、 S O B - N e u 、 t h i o s u l f a t e - MSM 四 種培養基（ 1 . 5 % a g a r ）固培標準 菌 Ac i d i t h i oba c i l l u s f e r ro o x i dan s （ BCRC13823 ），無菌落生成。前述四 種培養基液體培養標準菌，經 PCR 反應 （引子對 Fur1/Fur4, 303 bp ）確認菌體 可生長。相同引子對分析種植馬鈴薯土 壤 DNA 四批土壤，皆未偵測到預期片 段存在（ 303 bp ）。 5. 土壤 (S205) 萃取液中疑含有 MBOA (6-methoxy-2-benzoxazolinine) ，故以電 噴灑離子化游離法進行質譜分析。可見 離子 164.2 m/z (M-H) ，可能為 MBOA （分子量 1 6 5 . 1 5 ），但仍有許多干 擾峰，故以 SPE （ LiChrolut® RP-18, 40-63 μ m, MERCK ）方法純化土壤萃取 液，但並未達到純化之效果 ( 圖 44.) 。 SPE 之最適化條件將續進行測試。 6. 台灣地區木瓜田抗藥性基因分析，分析 台南、台中、花蓮及台東種植木瓜之 土壤，共篩選得 81 株 Kan R 菌， Kan R 菌的比例分別為 13.2% 、 4.7% 、 8.6% 及 14.5% ， Kan R 菌中含 nptII 基因比例 台中及台南 ( 非基改木瓜區 ) 皆為 0% ， 花蓮及台東 ( 均為基改木瓜區 ) 分別為 6.7% 及 100% ( 圖 45.) 。