藥毒所98年度

44 利用生物感測器 (biosensor) 檢驗環境毒物質之分生技術研發 生物感測器為一種分析裝置，主要 聯結生物性感應元件及訊息轉換元件所 組成者，可應用於農藥、重金屬及溶劑 類化合物於環境之監測。本研究針對綠 色螢光蛋白 (GFP) 以點突變技術完成 8 個胺基酸之修飾。已完成以 umuD 、 SulA 、 LexA 、 YbfE 、 Hoke 等 10 種 SOS 啟動子與 GFP 、 omega factor 增 強子之 18 種構築方式，以 pET28a + 為 載體，轉殖於大腸桿菌 BL21 菌株， 經 PCR 檢測及定序，證實構築皆正 確，且報導基因 GFP 可於添加 0.5 μ M IPTG 誘導螢光的產生。其中代 稱為 YL-1 之啟動子相對於 umuD 、 SulA 、 LexA 、 YbfE 及 Hoke 啟動子有 6~20 倍效能，初步測試 formadehyde 、 dimethysulfide 、 hydrogen peroxide 及 nalidixic acid 等毒化物，於處理後 2 小 時，即呈現最高螢光釋放量，且與藥劑 含量呈線性關係，可檢出濃度之極限 分別為 625 、 20 、 250 及 2.5 μ M ( 圖 32.) 。 圖 32. 以 YL-1 啟動子融合 GFP 綠螢光蛋白之感測器檢測 nalidixic acid 及 formaldehyde 的基因毒性與細胞毒性。