藥毒所98年度

2009 Annual Report 67 壹 試驗研 基改植物對環境生態之影響調查技術研究 1. 本年度分析種植基因改造馬鈴薯田 三個時期 ( 種植前 971014 、種植 中 980114 及採收後 980313) 之抗 卡那黴素細菌 (Kan r 菌 ) ， Kan r 菌含 nptII 基因 (721 bp ， 989 bp) 與土壤 樣品中 nptII 基因 (721 bp) 比例分 析。種植前 Kan r 菌比例介於 8.9% 至 11.3% 之間。種植非基改馬鈴薯 後土壤中 Kan r 菌比例介於 2.0% 至 9.3% 之間。種植基改馬鈴薯後土壤 中 Kan r 菌比例介於 0.3% 至 17.8% 之間。空白土壤中 Kan r 菌比例介於 0.7% 至 7.9% 之間。土壤 DNA 樣 品中皆未發現 nptII 基因與 Tn5 基因 (721 bp ， 989 bp) 存在。三個時期 共篩選了 210 株 Kan r 菌， Kan r 菌中 含 nptII 基因與 Tn5 基因比例為 0% (0/210) 。顯示土壤中的抗性菌與種 植基改馬鈴薯 ( 含 nptII 基因 ) 無 關。 2. 本年度主要是探討種植基改作物 是否會對土壤中氧化亞鐵硫桿菌 ( Thiobacillus ferrooxidans ) 氧化硫硫桿 菌 ( Thiobacillus thiooxidans ) 兩菌屬有 影響。經以標準 PCR 分析 (16S rRNA 基因， 1057 bp)21 個土壤樣品 DNA ， 僅有一土壤 DNA 含有 1057 bp ，顯 示 可 能 為 Thiobacillus ferrooxidans 或 Thiobacillus thiooxidans 兩 菌 屬 ( 圖 51.) 。再經功能性基因分析 (303 bp ， Fur gene ，三價鐵離子吸收調控 基 因， ferric iron uptake regulator gene) ，顯示土中僅含有 Thiobacillus ferrooxidans 菌 屬 ( 圖 52.) ， 再 以 303 bp 進行同步定量 PCR 分析土 壤 DNA 中 Thiobacillus ferrooxidans 含量，結果發現濃度低於偵測極 限 (< 3 pg/g soil)( 圖 53.) 。 表 示 土 壤 中 僅 含 微 量 之 Thiobacillus ferrooxidans ，因此種植基改作物 對 Thiobaci l lus ferrooxidans 及 Thiobacillus thiooxidans 兩菌屬分佈 尚無影響。 3. 排放水以厭氧培養基 (PYG+Kan 50 ) 篩選厭氧 Kan r 菌共得到 66 株， 經 PCR 分析其質體 DNA ， 66 株厭 氧 Kan r 菌皆不含 721 bp 與 989 bp ( nptII 基因 ) 。 4. 農試所隔離試驗田排放水共採集 16 個樣品，經收集水中 DNA ，以標準 PCR 分析水中轉基因，並以 PCR- DGGE (341fGC 及 534r ， 16S rDNA) 分析微生物相，在 16 個樣品中均 無基改馬鈴薯 (180 bp) 及基改水 稻 (280 bp) 之轉基因片段。其中有 4 個樣品含有基改木瓜 (398 bp) 之 片段，但皆低於同步定量 PCR 偵 測極限 (0.24 ng/mL 灌溉水 ) 。水中 微生物相經以 Cell Genomic DNA Purification 萃取水中 DNA ，再以 PCR-DGGE 分析菌相。結果顯示水 中菌相有規律性的依季節分群 ( 圖 54.) 。 5. 本 年 度 為 建 立 土 壤 中 B e n -