藥毒所94年度

17 35S 啟動子及 NOS 終結子設計引子，先進行 篩選式 PCR 檢測，再以標的基因設計引子， 進一步以 PCR 技術確認，行政院衛生署藥檢 局已由 Fluka Chemical 公司購得 0~5 ％ (W/W) GM 大豆，並以文獻之 35S 、 NOS 及 EPSPS DNA 片段為引子，進行 PCR 測定之研究。 本研究針對抗嘉磷塞轉基因大豆進行抗 藥特性、 CP4 EPSPS 基因序列自備抗體及大 豆轉基因植株之西方氏墨點反應等 DNA 之定 性分析，專一性檢測及鑑定大豆及其相關之加 工產品 ( 圖 10.) 。 圖 10. 抗嘉磷塞大豆葉片之基因組 DNA ，經聚合鏈鎖反應擴增之核酸片段。 • 假蓬屬雜草抗除草劑特性研究 • 於台灣中部採集 40 株不同地區之美洲假 蓬 ( Conyza bonariensis (L.) Cronq.) 種子，經播 種 及 育 苗 ， 以 0.5-1.5 kg ai/ha 嘉 磷 塞 (glyphosate) 噴施，施藥後 3-5 日，外觀傷害初 期徵狀為幼葉呈淡綠色、葉形狹小、生長速率 減緩，施藥後 7-10 日，對藥劑敏感植株葉片 褐化及死亡；對藥劑具抗性植株幼葉仍緩慢生 長，成熟葉則正常，由此徵狀區分為抗性、中 間型及感性各 7 、 21 及 11 株。再經由 0.25-20 kg ai/ha 嘉磷塞噴施具代表性之抗感植株，施 藥後 14 日，以乾重為基礎的 ED 50 R/S ＝ 10-16( 圖 11.) 。經由美洲假蓬葉片 shikimic acid 含量之測定顯示，施藥後 7 日，對感性植株之 shikimic acid 含量為抗性植株之 5 倍以上，藥 劑劑量愈高，感性植株 shikimic acid 累積量愈 多。 由 NCBI 基因庫比對嘉磷塞作用目標酵素 EPSP synthase 之 cDNA 序列，設計 2 組引子， 抽取對嘉磷塞抗及感性植株幼葉 RNA ，進行 RT-PCR 及 RACE 反應，完成抗、感植株 EPSPS cDNA 之解序，抗、感美洲假蓬皆有嘉磷塞標 的 酵 素 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EPSPS) 之 3 個 cDNA 基 因 (EPSPS1 、 EPSPS2 及 EPSPS3) ，轉譯後抗感植 株 EPSPS2 及 EPSPS3 完全相同，但抗、感植 株 EPSPS1 有 5 個胺基酸差異位置，可能影響 美洲假蓬抗性植株 EPSPS 酵素對嘉磷塞之親 和性，為造成抗性的原因之一。