藥毒所94年度

36 • 基改馬鈴薯與基改木瓜轉基因在土壤中殘留分析研究 • 基改馬鈴薯以 npt II 基因為選擇性基因， 本試驗設計可分析 nptII/35S-P 基因莢之兩個 長度的引子對，其中 932bp 用於標準 PCR 分 析，而 151bp 則可用於同步定量 PCR 分析。 經比較 7 種土壤 DNA 萃取方法，顯示 UC 試 劑組， CTAB/SDS 法，及珠擊 /SDS 法可用於 土壤 DNA 萃取。土壤 DNA 的純化以膠體純 化法適於應用在 PCR 反應上 ( 表 13.) 。 基改木瓜染色體 DNA 在土壤試管中，至 第 8 週仍可以 PCR 偵測到。基改馬鈴薯染色 體 DNA 則至第 16 週仍可偵測。 表 13. 以 5 種方法萃取土壤 DNA ，比較總 DNA 品質及萃取效率 萃取方法 總 DNA a (μg/0.1g soil) A 260 /A 230 A 260 /A 280 SG Kit 0.4 ± 0.045 0.5 ± 0.314 1.1 ± 0.032 UC Kit 5.0 ± 0.141 0.7 ± 0.059 1.2 ± 0.065 SDS/GTC 經 PEG8000 純化 4.2 ± 0.183 0.4 ± 0.045 1.3 ± 0.053 CTAB/SDS 經 PEG8000 純化 1.4 ± 0.105 0.8 ± 0.008 1.1 ± 0.029 Bead/SDS 經 PEG8000 純化 1.6 ± 1.448 0.7 ± 0.190 1.2 ± 0.040 a ：以 PicoGreen 定量。 • 基改植物對土壤微生物生態之影響調查技術研究 • 基改馬鈴薯使用 pCAMBIA-2301 作載 體，以 npt II 基因作為選擇性基因，依此基因 構築設計可分析 nptII/35S-P 基因特定長度 (932bp) 的 PCR 方法，結果證實基改馬鈴薯基 因確含有這個跨片段轉基因。以基改馬鈴薯含 抗藥性基因之 PCR 產物 932bp 為供體 DNA ， 於濾膜上與其細菌混合，可完成基因水平移 轉，移轉頻率在 10 -8 ~10 -9 之間，但於土壤試管 中進行則無基因水平移轉。 採集自農試所試驗田中之土壤，在初期篩 檢皆不含 nptII 基因 (721bp) 。共篩選出抗 Kan 細菌 68 株 (Kan R ) ，其中來自空白土樣中部份 菌株含 nptII 基因 (14/36) 。來自種植基改馬鈴 薯與種植非基改馬鈴薯之土樣中所篩選之細 菌則不含 npt II 基因。 Kan 抗性菌將續進行 BiOLOG 及 16S rDNA 分析。 自採集種植基改馬鈴薯與非基改馬鈴薯 之農試所試驗田土樣中，共採集到纖維素分解 真菌 35 株，目前鑑定完成的有 2 株可能為 Penicillium steckii ，及 P . lagena 。以 PCR-DGGE 分析菌相觀察種植基改馬鈴薯之土壤及種植 非基改馬鈴薯之土壤間菌相變化尚無有明顯 變化，需持續觀察。