藥毒所99年報

42 (2) 除草劑巴拉刈 ELISA 製備：除草劑殘 留之檢測多以高效液相層析等各式層 析法實施，但其耗時費資且可能製造 有機廢液，故一般常利用免疫酵素連 結反應 (ELISA) 進行預先快速篩選大 量樣品，以縮短時間。巴拉刈在國內 為普遍使用的除草劑之一，但快速檢 測方法卻不多見。本試驗擬以所產生 之巴拉刈特異性多株抗體製作快速篩 選試劑，以檢驗巴拉刈之殘留。首先 利用 Mannich reaction 法螯合巴拉刈 與攜帶蛋白 (carrier protein) 為載體免 疫紐西蘭白兔，待產生多株抗體後， 利用間接免疫酵素連結反應方式檢測 巴拉刈之殘留量。水體巴拉刈萃取之 回收率可達 77 - 83% 。以標準品巴拉 刈進行接合抗原與抗體間之特異性與 敏感性測試，利用棋盤方格法決定抗 血清與酵素結合體之最佳稀釋倍率， 結果顯示原體巴拉刈於不同倍數稀釋 下， mcKLH- 巴拉刈抗血清最佳稀釋 倍數為 10000X ~15000X ，可偵測巴拉 刈濃度線性範圍 10 ~ 200 ppb ，最低 偵測濃度為 10 ppb 。間接型 ELISA 對 市售商品回收之巴拉刈抗原可檢測濃 度為 20~ 100 ppb ( 圖 33.) 。 (3) 抗嘉磷塞雜草繖花龍吐珠特性及防治 研究： (a) EPSPS 核酸探針之製備： 以繖花龍吐株 EPSPS cDNA 全長片段 為模板，利用 PCR 技術將 DIG 標定 於 EPSPS 核酸上，因此核酸片段較 原 EPSPS cDNA (1551 bp) 略 長。 (b) EPSPS 之南方氏轉漬 (southern blot) 分析：約 20 μ g 抗及感性繖花龍吐株 的基因組 DNA ，分別添加 5 μ l Ase I 、 EcoR I 及 Spe 三種限制 ，將此 基因組核酸於 0.7% agarose 進行電泳 分析。再轉漬於帶正電的尼龍膜，以 抗性繖花龍吐株 EPSPS cDNA 片段 標定 DIG 為核酸探針，進行雜合反 應。結果顯示抗及感性繖花龍吐株基 因組 DNA 經 Ase I 、 EcoR I 及 Spe 三 種限制 反應分別皆有 2 、 2 及 1 條 核酸條帶，顯示抗及感性繖花龍吐 圖 33. 利用間接型 ELISA 分析，抗原 (KLH-p, KLH-R-p, KLH) 由 1000 ppb 連續稀釋至 0.1 ppb ，與稀釋 104 倍之 KLH-P 多株抗體 反應後測得之曲線圖。