藥毒所109年度

試驗研究 33 壹 圖 20. 不同菌株在不同培養基產物生物活性表現。 微生物農藥資源之研發與應用 為防止含外毒素蘇力菌被製造或 進口，因此針對 β -exotoxin 建立發酵 產物對鱗翅目 (Lepidopteran) 、鞘翅目 (Coleopteran) 、雙翅目 (Dipteran) 、葉 蟎 (mites) 、線蟲 (Nematode) 之生物檢測 方法 (bioassay) ，和外毒素基因 PCR 檢 測法。階段完成引進花豆葉飼育二點葉 蟎 ( Tetranichus urticae ) 方法、空心菜水 耕栽培飼育南方根瘤線蟲 ( Meloidogyne incognita ) 方法及飼料麥片飼育煙甲蟲 ( Lasioderma serricorne ) 方法並於本實驗 維持蟲源。完成產內或外毒素蘇力菌以 CYS 及 SMB 培養基製備供試樣品。完成 PCR 檢測產外毒素相關基因，證實內毒 素菌株不帶 cry 1B 基因，但產外毒素菌 株必帶有 cry 1B 基因、但不一定帶有 thu 核酸片段。此法可利用為先期判定否為外 毒素菌株之用。建立以含水介質支撐草莓 葉，利用噴藥塔處理二點葉蟎之技術，顯 示 SMB 培養外毒素菌株之外泌產物可殺 死葉蟎，其致死速度不如化學藥劑快，但 至終致死效果不亞於化學藥劑。但內毒素 菌株則無外毒素產生，無殺蟎效果。搭配 家蠅 ( Musca domestica ) 生物活性測試， 顯示 CYS 培養內、外毒素菌株之產物不 會影響家蠅的成長。 SMB 培養外毒素菌 株之外泌產物致使家蠅無法正常成長， 但內毒素菌株則無否。而顯示 CYS 培養 內毒素菌株之內生產物有效殺死小菜蛾 ( Plutella xylostella ) ，但外毒素菌株則否 ( 圖 20) 。 建立蘇力菌貝他外毒素之多種生物檢測方法 三 β- 外毒素菌株 B109a A301a δ- 外毒素菌株 Ab12 E911 SMB 上清 (1000 ppm) CYS 沈澱 (10 ppm) 非選擇性 Kill 雙翅目 Kill 蟎類 專一性 Kill 鱗翅目 結論： 內/外毒素菌株區分 1.基因層次：PCR可 2.蛋白質層次： SMB 上清→廣效→外毒素 CYS 沈澱→專一→內毒素 Non-toxic Non-toxic