藥毒所96年度

壹 貳 96年 參 肆 2007 Annual Report 圖 25. 大豆之根端及莖組織可檢測到 Pseudomo- nas P038 菌株 (KB 選擇性培養基 ) 。 微生物殺蟲殺菌基因之選殖及轉殖應用 以 111 株篩選分離自穀倉之台灣 蘇力菌菌株，利用 v i p3A 特異性引 子，進行 1.1kb 片段的 PCR 篩選，獲 得 66% 的篩獲率。取其一菌株（編號 B11-30a ）增幅選殖 vip 3 Aa 全長基因， 將其構築至 pSC-A 中間載體，進行全 長基因的定序及比對 ( 圖 26.) 。所選獲 之 2370 bp 的 vip 3 Aa 基因，與已發表 之 vip 3 Aa10 具有 99.4% 同源性。轉譯 後之胺基酸序列與 Vip3Aa10 ，僅有 7 個胺基酸的差異，同源性高達 99.2% 。 選殖 vip3Aa 基因至 pQE82 蛋白質表現 載體，進行 IPTG 的誘導及表現培養， 蛋白質電泳及西方墨點法分析，顯示 vip3Aa 基因，在大腸桿菌宿主中，可 受 IPTG 誘導及表現，產物約為 88 kDa ( 圖 27.) 。生物活性試驗結果， Vip3Aa 對於小菜蛾 ( Plutella xylostella ) 、擬尺蠖 ( Trichoplusia ni ) 、斜紋夜盜 ( Spodoptera litura ) 及甜菜夜蛾 ( Spodoptera exigua ) 幼 蟲，均不具殺蟲效果。完成粘質沙雷氏 菌幾丁質分解酵素基因之選殖，並測試 其於枯草桿菌之表現 ( 圖 28.) 。已完成 含幾丁質分解酵素基因重組核多角體病 毒質體之構築與篩選及初步重組病毒構 築。