臺灣農藥科學第四期電子書

60 臺灣農藥科學 第 4 期 而健康植株之樣本則無法增幅出任何產 物。第一次聚合酶連鎖反應所得之產物經 10 倍稀釋後，再以 R16F2n / R16R2 引子 對進行巢式聚合酶連鎖反應，得到 F2nR2 序列片段 ( 圖三 ) 。 四、 16S rDNA 定序及親緣關係比 對 聚 合 酶 連 鎖 反 應 所 得 之 16S-23S rDNA 片段進行定序，將 4 個菌系之序列 資 料 上 傳 至 NCBI (KU170532- KU170535) ，並於 BLAST 網站進行序列 比對，結果顯示其與造成青葙簇葉病 ( Celosia argentea phyllody and witches'- broom, KX426374) 、臺灣梨衰弱病 (pear decline-Taiwan, EF193157) 、甜麻花器葉化 症 ( Corchorus aestuans phyllody, KX645865) 、花椰菜簇葉病 (cauliflower phyllody, KC953000) 、 落 花 生 簇 葉 病 (peanut witches'-broom, JX871467) 及木豆 簇 葉 病 (pigeon pea witches'-broom, AB741637)… 等植物菌質體菌系之序列相 同度達 99.76% 。 以臺灣及國外豇豆植物菌質體菌系及 其他寄主植物菌質體菌系之 16S 序列片段 進行多序列比對，整理得到一致性序列 後，再以最大似然法繪製親緣關係樹狀 圖三 、以廣效性引子對 P1/P7 ( 左圖 ) 及 R16F2n/R16R2 引子對 ( 右圖 ) 進行長豇豆花器葉 化症組織之巢式聚合酶連鎖反應檢測。 M 為 1Kb DNA ladder ； D1-D3 為罹病植株 之葉柄樣本； H1-H2 為健康植株之葉柄樣本； P 為一條根簇葉病之正對照組； N 為 去離子水對照組。 Fig. 3. Results of nested polymerase chain reaction of the total DNAs extracted from symptomatic and healthy Vigna sesquipedalisa tissue using primer pairs P1/7 (Left) and R16F2n/R16R2 (Right). M: 1Kb DNA ladder; lane D1-D3: diseased tissues of V. sesquipedalisa ; lane H1-H2: healthy tissues of V. sesquipedalisa ; P: diseased tissues of Glycine tomentella ; N: ddH 2 O. M D1 D2 D3 H1 H2 P N M M D1 D2 D3 H1 H2 P N M