藥毒所96年度

壹 貳 96年 參 肆 0 2007 Annual Report 基改植物對環境生態之影響調查技術之研究 基改馬鈴薯的抗藥性基因 ( npt I I , 932bp) 與長片段缺失之基改細菌乙酸 鈣不動桿菌 ( Acinetobacter calocaceticus BD413, pFG4∆nptII) 於非殺菌土間的 移轉調查，土壤懸浮液置於選擇性培 養基 30 ℃培養 24 小時，結果均無轉 形菌生長。表示於非滅菌土中無移轉 頻率發生。農試所種植馬鈴薯試驗田 中 (95.02.13) 收集到 21 株 KanR 菌。 有 2 株 (Kan0212 、 Kan0234) 質體 DNA 含有 npt II 基因 (721bp) ( 比例 9.5 ％ ) 。 且兩株均有 932bp ( 圖 22.) ，其中定序 結果 Kan0212 與 Kan0234 均為 Binary vector pCAMBIA-2301 ，前者符合性 99% （ 776/779) ；後者符合性為 98% (800/810) 。 96 年 10 月農試所未種植基 改馬鈴薯之空白土樣，收集到 4 株， 分析後無 npt II 基因 (721bp) 。將硝化菌 標準菌 ( Nitrobacter winogradskyi , BCRC 17542 ) 加入土壤中，萃取其土壤總 DNA ，土壤粗萃取液以 PCR 分析，偵 測不到 697 bp 存在，但經 gel 純化後可 偵測到 697 bp 之存在。北溝隔離試驗樣 品萃取之土壤總 DNA 進行 PCR 分析， 未出現目標基因片段，土壤中硝化菌 PCR 產物 697bp 之偵測限值可至 5×10 -5 ng/0.1g soil 。農試所及北溝農場灌溉水 中含有基改木瓜之轉基因 (398bp) ，但 無基改馬鈴薯與基改水稻之轉基因。 同步定量 PCR (q-PCR) 分析灌溉水水 中基改植物 DNA 結果亦相同，但基改 木瓜轉基因含量低於檢量線下限值 ( 圖 23.) 。 398bp 送定序確認中。選用 C18-A 管柱，動相為 H 2 O ( 含 0.05% HOAc) 與 MeOH ，作梯度分析，各以 271 及 287 nm 偵測 BOA 及 MBOA 。土壤萃取量以 12.0g 為適。 BOA 及 MBOA 於土壤中回 收率皆達 97% 以上。種植基改木瓜土壤 與傳統木瓜土壤中無測出 BOA ，但可能 有 MBOA ( 表 6.) 。將收集純化後，再比 對吸收光譜與質譜。 M 212 234 ＋ － B 932bp 圖 22. 使用引子對 npt II-2-3/35-3 分析 Kan0212 與 Kan0234 之質體 DNA (932bp) ，結果均 含 932bp 。 P ：基改馬鈴薯； N ：負控，非 基改馬鈴薯； B ：空白分析組。 Marker ： GeneRuler TM 100 DNA Ladder 。