藥毒所99年報

44 (f) 利用 single nucleotide polymorphism (SNP) 及 PCR-RFLP 技術，建立抗性 繖花龍吐株之分子鑑定方法：於抗及 感性 EPSPS 基因序列單一鹼基對差異 處，設計抗性專一性引子，經由 PCR 測定，抗性繖花龍吐株的核酸條帶為 350 bp ，感性株則無法增幅此片段。 利用 Hae III 限制 檢測抗及感性繖花 龍吐株，則於感性株可將 EPSPS 全長 cDNA 切割為 332 bp 及 163 bp 二核酸 片段，抗性株則仍維持約 495 bp 長度 之核酸片段，此二分子標誌皆可共同 鑑定對嘉磷塞抗或感性之繖花龍吐株 ( 圖 35.) 。 (g) 針對 14 處高屏農地繖 花龍吐株之檢測對嘉磷塞之抗性：形 成優勢族群者共 14 個檢體，分別採 集其種子，於溫室育種為幼苗，分別 萃取其基因組 DNA ，經專一性引子之 multiplex PCR 及 PCR-RFLP 鑑定分 析，結果共有 4 株為抗性株， 10 株為 感性株，再配合藥劑劑量反應分析， 結果皆相同。 圖 35. 利用 PCR-RFLP 技術，於抗及感性繖花龍吐珠 EPSPS 差異處具 Hae III 限制 序列， 檢測抗及感性株。