藥毒所99年報

2010 Annual Report 45 壹 ． 試驗研究 微生物農藥資源之研發、轉殖與應用 七 (1) 4 株 含 有 非 cry1 基 因 之 蘇 力 菌 ( Bacillus thuringiensis ) 菌株， PCR 進 行 cry3 、 7 、 8 型基因的確認，結果顯 示含有 cry8 型基因 ( 表 9.) ，將 PCR 產物進行序列分析及比對，顯示前及 後半段序列分別與 Bacillus cereus 的 phosphohydrolase (MutT/nudix family protein) 及 dedA family protein 有 98% 及 99% 的同源性，但非為典型的 cry8 型基因。 2 株非典型 cry 型基因之蘇 力菌菌株，其 600 bp PCR 產物經定序 結果，其一與 cry1C 或 cry1D 相似， 另一與 cry1Aa 或 cry1Ab 或 cry1Ac 相 似。 5 株非典型 cry 型基因之蘇力菌菌 株其 16 S rRNA ， PCR 增幅約 1500 bp 產物經定序比對，結果顯示與 Bacillus cereus Rock4-18 及 Bacillus cereus AH1271 有 99% 的同源性。三非典型 Bacillus 經定序比對，其一與 Bacillus subtilis subsp. Subtilis 有 99% 相似度； 另二與 Bacillus amyloliquefaciens FZB 42, complete genome 有 99% 相似度。 (2) 本土光桿菌 Photorhabdus luminescens 0805-P5G 以聚合 連鎖反應 (PCR) 進行目標基因 prtA 之擴增，再將目 標基因片段與載體 pET29b 接合 ( 圖 36.) ，轉型至大腸桿菌 Escherichia coli Rosetta 中，再以 IPTG 進行大量誘導， 可表現出 PrtA 目標蛋白約 53 kDa ， 經由核 酸序列轉譯分析後可推衍出 474 個胺基酸序列，經由 MS/MS 分 析，部分胺基酸片段與先前由核 酸 序列推衍之胺基酸序列相吻合。將純 化後的 PrtA 蛋白酵素進行生化特性 分析，當溫度於 50 ℃、 pH 值為 10.5 時，此酵素具有最高的活性，於 28- 37 ℃ 時有較佳的熱穩定性，並在 pH 5-9 有較好的 pH 值安定性；而對金 微生物殺蟲殺菌基因之選殖及轉殖應用 表 9. 非典型 Bacillus 及 cry1 基因菌株之同源性序列比對結果