藥毒所95年度

70 農業藥物毒物試驗所九十五年度年報 十三、生物多樣性調查研究 • 植物絕對寄生菌遺傳訊息多樣性資料庫建立 • 本計畫今年度完成萵苣、波菜、山葵和 翠玉白菜等四種露菌標本採集、製作、傳統 分類及 ITS 分子標記之分子資料庫，同時完 成葡萄露菌之標本製作與傳統分類記錄。在 分子資料的應用方面，則設計萵苣露菌專一 性引子，可應用於偵測萵苣露菌（圖 52. ）。 圖 52. 以萵苣露菌專一引子偵測感病植株之 PCR 試驗。 2 到 5 為加入不同 DNA 模版之反應產物結果。 1. 空白對照組； 2. 萵苣露菌； 3. 健康株； 4. 有病徵之病株葉片； 5. 無病徵之病株葉片。 • 菊科藥用草本植物分子鑑定系統建立 • DNA 分子標誌法具有專一性、穩定性、微 量、準確、易操作及快速等優點，其中 ISSR 方 法可用於鑑定族群的親緣關係及分辨品系間微 小之差異。針對 5.8S rRNA-ITS 序列之比對， 亦為鑑定中草藥物種的有利證據，常被應用於 被子植物之親源關係之研究。本研究利用 ISSR 技術及 5.8S rRNA-ITS 序列之差異，進而設計 為利用 Mse I 、 Hae III 、 Mse I 、 Sal I 、 Xho I 、 Sph I 及 Nsi l 等限制 酶 反應之 PCR-RFLP ，以 及專一性引子之 multiplex PCR 檢測方法，已 完成 12 種菊科植物之外觀形態特性比較及鑑 定。 12 種菊科植物 5.8S rRNA-ITS 序列之相 似度界於 80-99% 之間，已登錄於 NCBI GenBank 。正品之台灣蒲公英、西洋蒲公英、中 國蒲公英、與替代品之兔仔菜及鵝仔菜可經由 ISSR 、 PCR-RFLP 、 multiplex PCR 及核酸晶片 之檢測方法鑑定。大花咸豐草、小白花鬼針及 白花鬼針完成 5.8S rRNA-ITS 序列比較，並建 立 ISSR 及 PCR-RFLP 之檢測方法。紫背草及 櫻絨花亦完成 5.8S rRNA-ITS 序列比較，建立 PCR-RFLP 及 multiplex PCR 之檢測方法（圖 53. ）。