藥毒所95年度

71 圖 53. 利用專一性引子之 multiplex PCR 檢測 8 種菊科草本植物（ A ）及 3 種蒲公英植物（ B ）。 （ A ） 1. 臺灣蒲公英 , 2. 西洋蒲公英 , 3. 中國蒲公英 , 4. 兔兒菜 , 5. 鵝仔草 , 6. 苦滇菜 , 7. 黃鵪菜 , 8. 刀傷草。 （ B ） 1. 臺灣蒲公英 , 2. 西洋蒲公英 , 3. 中國蒲公英 , 4. 蒲公英屬。 • 抗嘉磷塞基因選殖及轉殖系統建立 • 利用 RT-PCR 及 RACE 技術，選殖抗嘉 磷塞美洲假蓬 EPSPS 基因，經由大量製備及純 化 EPSPS 蛋白質及酵素活性分析，確證 EPSPS-3 基因編碼之 EPSPS 酵素具抗藥特 性。 EPSPS-3 cDNA 長度為 1338 bp ，選為轉殖 之標的基因。轉殖之作物為菊花，菊花組織培 養條件之測試，包括組織消毒、癒傷組織及再 生培養基製備條件，結果顯示以 MS 培養基添 加適量之 NAA 及 BA 可誘導癒傷組織的形 成及再生之植株。抗嘉磷塞基因之載體構築及 轉殖系統，包括 EPSPS-3 基因、 35S 啟動子、 阿拉伯芥葉綠體 transit peptide 及 nos 終結 子，以 pCambia1305.1 為載體，將抗性基因轉 殖於農桿菌（ LBA4404 ），再以農桿菌感染菊 花葉片。經由菊花葉片感染轉基因，約於 30 日 後形成癒傷組織，以 GUS 呈色反應及轉基因 之 PCR 檢測，顯示已可將抗嘉磷塞 EPSPS-3 基因轉殖於菊花葉片，轉殖率約 5% （圖 54. ）。 1 2 3 4 1000 1500 500 (bp) (A) (B) 圖 54. 抗嘉磷塞 EPSPS 基因轉殖於菊花，經 GUS 呈色之癒傷組織（ A ）及轉基因之 PCR 確證（ B ）。 1. vir 基因 , 2. EPSPS 基因 , 3. 35S 啟動子 , 4. EPSPS/ NOS 核酸片段。