藥毒所97年度

壹、試驗研究 35 草本植物抗蟲基因選殖與應用 於金花石蒜選殖凝集素 (lectin) 基因並 完成解序，其 cDNA 長度為 477 bp ，且具 有 3 個與 mannose 鍵結的特定序列。進而 分別完成以原核的大腸桿菌及真核的酵母 菌為寄主之凝集素融合蛋白 ( 約 19.9 kDa) 表達系統，比較二表達系統的主要差異： 酵母菌為寄主者須經過 2 次抗生素篩選及 2 次轉形過程，以增加載體數量及提高轉 殖菌株轉基因的拷貝數；構築之載體須先 以限制 進行線性化，因此於轉形及誘導 凝集素表達共需 15 日，較以大腸桿菌者 (4 日 ) 多約 3 倍時間，同時過程中須轉換 4 種培養基，較以大腸桿菌者 ( 僅 LB 培養 ) 繁複。金花石蒜凝集素融合蛋白的表達量 ( 圖 33.) ：以大腸桿菌表達的蛋白量為酵母 菌表達者的 5 倍以上。以大腸桿菌及酵母 菌為寄主，誘導表達的金花石蒜凝集素， 二者之凝集活性無明顯差異，因此欲大量 表達此蛋白宜選用大腸桿菌為寄主，具有 省時、高效及維持凝集素蛋白構型正確的 優點。 圖 33. 金花石蒜 lectin 以大腸桿菌及酵母菌為寄主表達蛋白之凝集活性比較。 (A) 大腸桿菌 , (B) 酵母菌。