藥毒所93年度

19 shikimic acid 含量為抗性植株之 8~10 倍，藥劑 劑量愈高，感性植株 shikimic acid 累積量愈 多，抗性株的幼葉於施藥後 2~3 日， shikimate 亦呈現增加現象，隨後含量明顯降低，成熟葉 於施藥前後無明顯改變 ( 圖 8.) 。 由 NCBI 基因庫比對嘉磷塞作用目標酵素 EPSP synthase 之 cDNA 序列，設計 2 組引子， 抽取對嘉磷塞抗及感性植株幼葉之 RNA ，進 行 RT-PCR 及 RACE 反應，抗及感性野茼蒿 EPSPS 基因之解序各得 3 條 cDNA ，登錄於 NCBI 之 accession number 分 別 為 ： S-EPSPS1(AY834203) 、 R-EPSPS1(AY834204) 、 S-EPSPS2(AY834205) 、 R-EPSPS2(AY834206) 、 S-EPSPS3(AY834207) 及 R-EPSPS3(AY834208) ， 抗及感性 EPSPS1 及 EPSPS2 序列之相似度達 99% ，分別有 11 及 13 個鹼基之差異，抗及感 性 EPSPS3 序列之相似度為 98% ，有 27 個鹼 基之差異，轉譯後仍有 16 個胺基酸之差異， 其中抗性野茼蒿第 242 及 243 個胺基酸發生缺 失現象，可能為野茼蒿對嘉磷塞產生抗性的原 因之一。 抗感野茼蒿植株種子及葉片組織，培養癒 傷 組 織 之 適 當 培 養 基 為 1/2MSD1 或 1/2MSD2 ，於癒傷組織形成後，移植於 1/2 MS 添加 1 mmp NAA 培養基，可降低癒傷組織褐 化現象。 圖 8. 嘉磷塞對野茼蒿 shikimic acid 含量變化之影響。 (A) 新生幼葉、 (B) 成熟葉。 0.5 kg ai/ha 嘉磷塞處理 1~7 日。 • 抗嘉磷塞植物免疫檢測系統建立 • 大豆植株經由噴施嘉磷塞篩選具傷害徵狀 ( 非轉殖 ) 及無傷害徵狀 ( 轉殖 ) 者，分別抽取 genomic DNA 。經由以含 BamH I 及 Xho I 切位之 5’-CAAGCTTGATGCTGCAGGGCTTTGGC-3’ 及 5’-ATCCTCGAGAATCGGATATTCGTCGAT- 3’ 之 2 引子，進行 PCR 反應，於抗嘉磷塞大豆 植材的基因組 DNA 中可擴增約 350 bp 的核酸 片段，非抗嘉磷塞者則無此核酸片段。 經由轉殖於大腸桿菌，選殖含 350 bp inserted DNA 的單一菌株，確證此擴增之核酸