藥毒所93年度

20 片段為 CP4 EPSPS 基因第 615 G 至 971 T 鹼基， 長度為 357 bp 。將此 PCR 產物經由 T4 ligase 反應，接合於 pET-28a-c(+) 載體，再轉殖於大 腸桿菌 BL21(DE3) strain ，以 IPTG 之誘導 CP4 EPSPS 融合蛋白質表現，經純化後可回收單一 蛋白質 ( 約 25 KDa) 製備抗體。 以抗嘉磷塞之大豆標準品 ( 抗性轉基因之 比率： 0.1 、 0.5 、 1 及 2%) 及大腸桿菌之 CP4 EPSPS 融合蛋白質 ( 正對照組 ) ，進行西方氏墨 點免疫分析，總蛋白質含量 15~20 µ g 之大豆 標準品皆可於約 58 KDa 處呈現一明顯條帶， 與 CP4 EPSPS 蛋白質之 455 個胺基酸分子量 相符。顯示 CP4 EPSPS 抗體分析之敏感度可 達 0.1% 之抗嘉磷塞大豆。檢測抗嘉磷塞大豆 之葉片、種子及市售豆漿皆可於約 58 KDa 處 呈現一明顯條帶，檢出抗嘉磷塞之 CP4 EPSPS 蛋白質 ( 圖 9.) 。 圖 9. 西方氏墨點法分析抗嘉磷塞大豆。 (A) 抗嘉磷塞大豆之標準品 (0.1 、 0.5 、及 2% ，對照組為大腸桿菌之 CP4 EPSPS 融合蛋白質 ) 。 (B) 第 1 欄為非抗性大豆葉片，第 2 欄為非抗性大豆種子，第 3 欄為抗性大豆葉片，第 4 欄為抗性大豆種子， 第 5 欄為豆漿，第 6 欄為豆腐，第 7 欄為豆干，第 8 欄為 0.1% 大豆標準品 (RRS) ，第 9 欄為 0.2% 大 豆標準品 (RRS) 。 • 大花咸豐草核糖體核酸基因及間隔區遺傳變異 • 於台灣地區 22 個鄉鎮，採集 27 株大花咸 豐草 ( Biden pilosa var. radiata ) 、 15 株小白花鬼 針 ( B. pilosa var. pilosa ) 及 12 株白花鬼針 ( B. pilosa var. minor ) 植物種子，共 54 個樣品，利 用 PCR 及 PCR-RFLP 技術，分析大花咸豐草 ITS1-5.8S rRNA-ITS2 核酸序列。 27 個大花咸 豐草樣品依據序列長度可區分為 A(633 bp) 及 B(630 bp) 2 群，其中有 9 個樣品為 A 群， 18 個樣品為 B 群。所有植株之 ITS1 及 5.8S rRNA 序列長度皆為 253 及 164 bp ， A 及 B 群植株 ITS2 的長度分別為 216 及 213 bp ，大花咸豐 草樣品中有 5 個植株於 5.8S rRNA 發生 1~2 個 鹼基之變異， A 群植株 ITS1 較 ITS2 易發生變 異， A 及 B 群植株 ITS1-5.8S rRNA-ITS2 序列 之相似度界於 95~97% 之間。 小白花鬼針及白花鬼針序列長度皆為 633 bp ， ITS1 較 ITS2 易發生變異，變異度低，相 似度高達 98~99% 。大花咸豐草 PCR 產物經由