臺灣農藥科學第四期電子書

殺菌劑對花粉活力之影響 71 本研究以溫室栽培之彩綠種胡瓜 ( Cucumis sativus L. ‘Cai Lu’) 花朵為材 料，進行殺菌劑對花粉活力影響之相關測 試。選擇 10~12 節位葉片完全展開之植 株，於上午八至九時間取 5~7 節位盛開之 花朵，放置於密封袋中，摘除花冠後，以 解剖針沾取少量液態培養基，自花藥表面 刮取下花粉，再將花粉混入培養液中均勻 混和備用。有關花朵取樣最佳時間，依 Kaefer et al. 針對玉米花粉粒之活力調查 研究，亦顯示出一天當中之上午九時左 右，採集之花粉粒可獲得最佳的結果 (12) 。 二、供試藥劑 選 擇 胡 瓜 白 粉 病 防 治 藥 劑 菲 克 利 (hexaconazol) 之 分 析 級 純 品 試 藥 (analytical grade; Sigma-Aldrich) 及商品化 成品 [5% 水懸劑 (SC) ；台灣日產化工股 份有限公司 ] 作為本研究測試藥劑，其中 純品試藥以 2.25% 甲醇溶液配置成不同濃 度，成品則以純水稀釋成不同劑量後備 用。 三、培養基配置 本研究以 Brewbaker and Kwack (8) 所 發表之 BK 培養基作為花粉細胞之基礎培 養基，除探討蔗糖濃度 [10% (w/v) 、 15% (w/v)] 及是否添加 10% PEG4000 外，其 餘組成分為 0.01% (w/v) boric acid 、 0.03% (w/v) Ca(NO 3 ) 2 • 4H 2 O 、 0.02% (w/v) MgSO 4 • 7H 2 O 及 0.01% (w/v) KNO 3 ，同 時調整至 pH7.0 。 四、花粉活力檢測 ( 一 ) 花粉萌發率及花粉管伸長長度 取適量含有花粉粒細胞之培養液滴於 載玻片凹穴 (15×0.8 mm ；直徑 × 深度 ) 上，並確保每凹穴約含 50~150 粒之花粉 粒。所有處理需於 1 小時內操作完成，以 維持花粉活力。之後再將載玻片置放於搭 配有數位相機 (Nikon Cooxplx P5100) 之 光學顯微鏡 (Olympus SZ61) 上，並於 45 倍放大倍率下觀察與紀錄，後續利用 UTHSCSA Image Tool 軟體 (Developed by Wilcox et. al. at the University of Texas Health Science Center, San Antonio (UTHSCSA) 進行花粉管長度之量測。花粉萌發則以花 粉管伸長之長度超過花粉粒直徑視為萌發 標準。 ( 二 ) 氯化三苯基四唑 (2,3,5- Triphenylte- trazolium chloride; TTC) 染色法 本研究依 Cook and Stanley 發表之 TTC 染色法經部分修正後採用 (10) 。取適 量花粉粒細胞混入 60% 蔗糖中，再與等 體積之菲克利供試藥液均勻混和後，靜置 於 25 ℃ 恆溫箱中遮光處理 4 h 。取出後於 25 ℃ 下離心 (10,000 g) 3 min ，去除上清 液，加入 400 μL 含有 1% TTC 之 15%