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臺灣農藥科學 第
1
期
52
Ab12
、
Btk
E911
分別由本實驗室自行分離，
Btk
ABTS351
、
Bta
ABTS1857
則分離純化自
以下來源之市售蘇力菌產品。
供試之蘇力菌產品，有鮎澤蘇力菌
(
Bta
) Ab12 60% (30,000 DBMU/mg) WP (
可
濕性粉劑
) (
福壽實業先導成品
)
、鮎澤蘇
力 菌
(
Bta
) ABTS1857 48.1% (35,000 DBMU/
mg) WG (
水分散性粒劑
) (
台灣住友化學
)
、
庫斯蘇力菌
(
Btk
) E911 60% (30,000 DBMU/
mg) WP (
福壽實業
)
及庫斯蘇力菌
(
Btk
)
ABTS351 23.7% (16,000 IU/mg) WP (
台灣嘉
潔
)
等，供盆栽及田間試驗用。
二、蘇力菌之促生及抑菌基因檢
測
以專一性引子對進行蘇力菌的基因分
析，檢測包括植酸酶
(phytase)
、酸性磷酸
酶
(acid phosphatase)
、 嵌 鐵 物 質
(sidero-
phore)
、吲哚
-3-
乙酸
(
ipdC
)
、
1-
氨基環丙
烷
-
羧酸脫胺酶
(
accd
)
、幾丁質分解酶
(
chitB
和
chit36
)
、
β
-1,3-
葡萄聚醣水解酶
(
β
-1,3-
glucanase)
、醯基高絲氨酸內酯
(
aiiA
)
及雙
效菌素
A (
zmaR
和
orf2
)
等基因
(4, 22, 32, 33)
。
三、蘇力菌之促生及抑菌活性生
化測試
(
一
) 1-
氨 基 環 丙 烷
-
羧 酸 脫 胺 酶
(ACCD)
活性分析
依 據
Penrose
與
Glick (2003)
(30)
之 方
法修改後進行，將供試菌株先以
Nutrient
broth (NB) (beef extract 0.3%
、
peptone 0.5%)
活化，再以
DF medium (
含
0.5 M ACC)
偵
測
1-
氨基環丙烷
-
羧酸受到
ACCD
作用後
產生
α
-ketobutyrate
之情形，來判斷是否有
活性。
(
二
)
吲
哚
-3-
乙酸
(IAA)
產量分析
依 據
Gordon
與
Weber (1951)
(14)
之
方法修改後進行。供試菌株以分光光度
計
(OD
530
)
進行樣品量測。並以
98% IAA
(indole-3-acetic acid, Sigma-Aldrich Inc., Sten-
heim, Germany)
為標準劑，利用直線迴歸求
取檢量線，計算出菌株產生
IAA
的濃度。
(
三
)
溶磷活性分析
依據
Pikovskaya (1948)
(31)
之方法，將
供試菌株培養於
30
°
C Pikovskaya
’
s medium
(PVK medium)
中，觀察是否有透化圈產生，
以判斷菌株之溶磷能力。
(
四
)
嵌鐵物質之活性測試
依 據
Schwyn
與
Neilands (1997)
(36)
之
方法，將供試菌株培養於
Chrome azurol S
(CAS)
培養基，進行嵌鐵物質活性分析，觀
察培養基之呈色變化。
(
五
)
幾丁質分解酶之活性分析
參考
Rojas-Avelizapa
(34)
等人之方法，
將 供 試 菌 株 以
Colloidal chitin agar plates
(NaNO
3
0.3%
、
MgSO
4
．
7H
2
O 0.05%
、
KH
2
PO
4
0.1%
、
chitin 1%
、
Bacto agar 1.5%)
進行活性