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增益植物健康之多功能蘇力菌研究
53
分析，觀察透化圈大小，判斷幾丁質分解
酶之分解效力。
(
六
)
尿素分解酶之活性分析
依據
Mora
(25)
等人之方法，將供試菌株
接種至
5 mL Trypticase soy broth (TSB) (5
μ
M
NiCl
2
、
10 mM Urea)
中，經培養、離心，後
續以
30
μ
L Solution A (urea 2 g
、
95% ethanol
2 mL
、
H
2
O 4 mL)
重新懸浮，再加入
470
μ
L
Solution B (KH
2
PO
4
0.1%
、
K
2
HPO
4
0.1%
、
NaCl 0.5%
、
phenol red 0.002%)
均勻混合，反
應
72 h (37
°
C)
，觀察溶液之呈色變化，若顏
色由黃色轉變成粉紅色
(
顏色深淺程度，判
斷依據
)
，則表示具有尿素分解酶。
(
七
)
蛋白質分解酶之活性分析
依據
Abdel Galil
(1)
之方法，將供試菌株
以
Gelatin agar plates (K
2
HPO
4
0.2%
、
glucose
0.1%
、
peptone 0.5%
、
gelatin 1.5%
、
agar 1.5%)
進行活性分析，菌株培養
24
至
48 h (30
°
C)
，
觀察是否有透化圈產生，以判斷蛋白質分
解酶之分解效力。
(
八
)
脂質分解酶之活性分析
參考
Kumar
(20)
等人之方法，供試菌株
以
Tween 80 agar plates (peptone 1%
、
NaCl
0.5%
、
CaCl
2
．
2H
2
O 0.01%
、
agar 2%
、
Tween
80 1%)
進行酵素活性分析，菌株培養
24
至
48 h (30
°
C)
，觀察是否有沉澱物產生，以判
斷脂質分解酶之分解能力。
(
九
)
氰化物分析
參考
Lorck
(24)
之方法，將供試菌株培養
於
Trypticase soy agar (TSB 3%
、
glycine
0.45%
、
agar 1.5%)
，並在培養皿上蓋中，
放入含有
Cyanide solution (picric acid 1%
、
Na
2
CO
3
2%)
之濾紙，培養
7 d (30
°
C)
，觀察
濾紙之呈色變化，若顏色由黃色轉變成為
紅棕色，表示具有氰化物生成。
(
十
)
硝酸還原酵素分析
供試菌株培養於
5 mL Nitrate broth (pep-
tone 0.5%
、
meat extract 0.3%
、
potassium ni-
trate 0.1%)
中，培養
24 h
、取上清液，各別
滴入數滴
Reagent A (0.8% sulfanilic acid in 5 N
acetic acid)
及
Reagent B (0.6% N,N-Dimethyl-
1-naphthylamine in 5 N acetic acid)
，均勻混合
並觀察其顏色，若顏色未出現紅色者則加入
少量鋅粉，再次觀察其顏色變化。
四、蘇力菌耐鹽性測試
以
NA
培養基，分別加入不同鹽濃度
(NaCl 1%
、
2%
、
4%
及
6%)
進行測試，鹽濃
度
0.05%
作為對照組，使用濾紙圓盤擴散法
(filter paper disc agar diffusion method)
進行
試驗，在培養條件下，觀察蘇力菌生長之
直徑大小。
接著進行不同鹽濃度環境
(2%
及
4%)
下，蘇力菌
IAA
及尿素分解酶試驗，以鹽
濃度
0.05%
作為對照組，操作過程依三
(
二
)
及三
(
六
)
進行試驗。