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臺灣農藥科學 第
1
期
4
用指南」
(1)
之規範進行，且經本所實驗動
物照護及使用小組
(Institutional Animal Care
and Use Committee, TACTRI)
審查通過。
二、試驗農藥：試驗農藥為針對國內具
高殘留且具神經毒性的殺蟲劑益達胺
(Imi-
dacloprid
，
95% TC
，興農股份有限公司
)
，
混合不同作用機制但具肝腎毒性之殺菌劑
四氯異苯腈
(Chlorothalonil
，
98% TC
，台灣
庵原農藥股份有限公司
)
與具肝毒性之菲克
利農藥
(Hexaconazole
，
95% TC
，興農股份
有限公司
)
。
三、試驗設計：
3
種農藥以
7
種不同
組合混合投藥後，以探討
3
種不同毒性作
用機制農藥同時混用後對動物肝、腎與神
經毒性之影響。農藥單劑劑量之推估為依
據
1/3 LD
50
、
1/5 LD
50
或
1/10 LD
50
值，或以
人體每日可接受劑量
(acceptable daily intake,
ADI)
回推或參考
90
天文獻無毒害劑量
(no
observed adverse effect level, NOAEL)
回推。
最後各農藥單劑劑量分別為益達胺劑量為
75 mg/kg BW
，四氯異苯腈劑量為
200 mg/
kg BW
；菲克利劑量為
150 mg/kg BW
，溶媒
為玉米油
(Sigma-Aldrich, Missouri, USA)
；
對照組只投予溶媒
10 mL/kg BW
。試驗計分
8
組包括空白對照組、四氯異本晴
200 mg/
kg BW
、益達胺
75 mg/kg BW
、菲克利
150
mg/kg BW
、四氯異本晴
200 mg/kg BW
混合
益達胺
75 mg/kg BW
、四氯異本晴
200 mg/
kg BW
混合菲克利
150 mg/kg BW
、益達胺
75 mg/kg BW
混合菲克利
150 mg/kg BW
及
同時混合
3
種農藥之動物投藥處理組。
四、試驗方法：每試驗組大鼠雌雄鼠
各
5
隻
(N = 10)
依其劑量每週以胃管投藥
5d
連續
4 wk (10 mL/kg BW)
，進行農藥對大
鼠之
28
天餵食亞急毒性試驗，試驗準則符
合美國環保署農藥安全評估準則「
28
天餵
食毒性」試驗規範
(17)
，及經濟合作與發展
組織「
28
天餵食毒性」試驗規範
(8)
。處理
後每日記錄是否出現中毒症狀、症狀發生、
復原及死亡時間，試驗連續觀察至處理第
28
天試驗結束為止並於每週稱大鼠體重
1
次。另於投藥
28
天後以乙醚麻醉犧牲，由
後腹部大動脈收集血液，所採集血液及血
清作為血液學、血清生化等分析，同時採
集腦、肝、腎紀錄臟器重。
五、血清生化酵素學檢查：
28
天試驗
結束後，以乙醚麻醉大鼠並自腹部大動脈
放血採集血清，並以血清生化分析儀
(Fuji,
Tokyo, Japan)
分析血清中丙氨酸轉胺酶
(ala-
nine aminotransferase, ALT)
、天門冬氨酸轉
胺 酶
(aspartate aminotransferase, AST)
、 丙
麩氨轉肽酶
(gamma-glutamyl transpeptidase,
GGT)
、血清尿素氮
(blood urine nitrogen,
BUN)
及肌酸酐
(creatinine)
等酵素。
六、組織病理評估：所有大鼠經剖檢
觀察體內肉眼病理變化，並採集臟器浸泡
於
10%
中性福馬林溶液中固定
1 wk
，經組
織粗修、脫水、透明化、石蠟浸潤及包埋
等步驟處理製成組織石臘塊，再以石臘組
織切片機
(Leica, Nussloch, Germany)
切成
3
μ
m
厚度之組織切片，以
Hematoxylin &
Eosin (H & E)
染色並於光學顯微鏡
(Nikon,
Tokyo, Japan)
觀察組織病理變化並以影像照
相機
(Nikon, Tokyo, Japan)
擷取影像。
七、肝臟油紅
(Oil Red O)
與
gamma GT