74 / 220
臺灣農藥科學 第
1
期
72
美洲假蓬
(
C. bonariensis
)
、車前草
(
Plantago
lanceolata
)
及牛筋草
(
Eleusine indica
L.)
等抗
性生物型
(biotype)
，至今全球抗嘉磷塞雜草
共有
35
種，分布於
16
個國家以上，危害
的面積已超過
10
萬公頃，以禾本科植物為
主有
19
種，其次為菊科及莧科植物分別為
9
及
5
種，依據各國於除草劑抗藥性雜草國
際調查
(International Survey of Herbicide Re-
sistant Weeds)
將抗嘉磷塞基改
(glyphosate-
resistant, GR)
作物面積與抗性草數量作圖，
結果顯示隨著
GR
作物栽種面積上升，抗性
草數量亦明顯大量增加
(13, 18)
。
臺灣中部地區果園之華九頭獅子草
(
Di-
cliptera chinensis
(L.) Juss)
已證明具有自然耐
嘉磷塞藥劑之特性
(2, 39)
、牛筋草、美洲假蓬
也在全臺出現抗嘉磷塞植株
(1, 3, 4, 5)
。近年來
於臺中市、南投縣以及高雄縣的果園與農
地田埂，陸續出現噴施嘉磷塞一般田間施
用劑量，無法有效防除繖花龍吐珠
(
Hedyotis
corymbosa
(L.) Lam.)
，致使繖花龍吐珠成為
園區內的覆蓋度增加的雜草。繖花龍吐珠
為茜草科
1
年生雜草，分布於熱帶及亞熱
帶地區，普遍生長於臺灣低海拔之溝邊、
路旁、休耕田及果園，繖花龍吐珠全年可
萌芽生長，開花結果期主要於暖季，嘉磷
塞無法有效防治的生物型持續增加及擴散
中。現今全球尚未出現繖花龍吐珠抗除草
劑的相關報導，本研究測試繖花龍吐珠對
嘉磷塞的耐受性、
EPSPS
酵素及莽草酸含量
等生理反應，同時選殖
EPSPS
基因，探討
因點突變的抗藥特性，建立檢測方法，做
為後續調整用藥種類之依據。
材料與方法
一、化學藥品及儀器
試驗用藥品、儀器及廠牌：嘉磷塞異丙
胺鹽
(glyphosate-isopropyl ammonium, 41% S
，
億豐公司
)
、嘉磷塞
(
N
-phosphonomethyl
glycine, Sigma)
、
TRIzol (Thermo)
、 異 丙 基
-
β
-D-
硫 代 半 乳 糖 苷
(isopropyl-
β
-D-
thiogalactopyranoside, Sigma)
、甘氨酸
(gly-
cine, Sigma)
、過碘酸
(periodic acid, Sigma)
、
乳酸脫氫酶
(lactate dehydrogenase, Sigma)
、
丙酮酸激酶
(pyruvate kinase, Sigma)
、
pGEM
T-easy vector
載 體
(Promega)
、
pET-28 vec-
tor
載 體
(Amersham Pharmacia)
、 連 接 酶
(ligase, Promega)
、
Bam
HI
限 制 酶
(MBI)
、
Eco
RI
限制酶
(MBI)
、
gel extraction kit (Gen-
eMark)
、反轉錄聚合酶鏈反應試劑組
(one-
step RT-PCR kit, Invetrogen)
、
SMART RACE
kit (Clontech)
、聚合酶反應器
(PCR thermal
cycler, GeneAmp 2400, Perkin-Elmer)
。
二、測試繖花龍吐珠對嘉磷塞之
耐受性
自臺中市及高雄縣
5
處田區及果園，採
集繖花龍吐珠種子，分別於溫室播種及培
育，植株約
12 ~ 15
葉齡，噴施次致死量
(0.82
kg a.e./ha)
之嘉磷塞，施用藥劑為嘉磷塞異
丙胺鹽
(41%
溶液
)
，進行初步篩選，選出代
表性之感、抗繖花龍吐珠，感性植株噴施
0
、
0.10
、
0.20
、
0.41
、
0.82
、
1.64
及
3.28 kg a.e./