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抗嘉磷塞雜草之變異與鑑定
77
RACE
技術延伸增幅
2
端核酸，結果獲得繖
花龍吐珠
EPSPS
全長
cDNA
，抗及感性株的
EPSPS
皆為
1,551 bp (
圖三
B)
。二者序列相
互比較後之相似度為
99.3%
，其間有
11
個鹼
基之差異
(
圖四
)
，轉譯後皆有
517
個胺基
酸，抗及感性株
EPSPS
胺基酸則有
7
處差異
點，分別為
P96S
、
L107P
、
P178S
、
R213K
、
V259M
、
V283E
及
C299S (
圖五
A)
。
四、嘉磷塞噴施繖花龍吐珠後之
EPSPS
酵素活性
將抗及感性繖花龍吐珠純化後的
EPSPS
蛋白進行定量，分別取
5
μ
g EPSPS
蛋白進
行活性測定。結果感性繖花龍吐珠的
EPSPS
酵素於未施嘉磷塞前，其活性即高於抗性
株
EPSPS
活性，分別為
28
及
17 unit/mg
，
但
0.1 mM
及
1.0 mM
嘉磷塞即造成感性株
的
EPSPS
活性下降約
30%
及
72% (
圖六
)
；
感性株的
EPSPS
活性仍可維持約
97%
及
92%
，顯示抗性繖花龍吐珠
EPSPS
酵素活
性於
1 mM
嘉磷塞仍高於感性株的
3
倍
(
圖
六
)
。
五、利用單核苷酸多型性技術檢
測抗及感性繖花龍吐珠
於繖花龍吐珠
EPSPS
蛋白第
178
的胺
圖二、抗性及感性繖花龍吐珠於
0.82 kg a.e./ha
嘉磷塞處理後
10
日內莽草酸含量之變化。
Fig. 2.
Accumulation of shikimic acid in glyphosate-resistant (R) and glyphosate–susceptible (S)
Hedyotis corymbosa
seedlings 10 days after treatment with 0.82 kg a.e./ha glyphosate.