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臺灣農藥科學 第
1
期
200
性判定標準為試驗物與媒介物處理組淋巴
結細胞增生數量之比值
(ratio)
，亦稱為刺激
指數
(stimulation index, SI)
。如達特定數值
或以上時，即表示該試驗物具有潛在陽性
皮膚過敏反應。依目前國際上偵測淋巴結
細胞增生結果方式的不同而分為
3
種測試
方法
(
表一
)
；
(1)
放射線物質標定法，為
LLNA
動物模式初期開發時之測試方法，並
於試驗過程中需具備放射性檢測儀器與風
險防護等特殊裝備，主要是測量淋巴結增
生細胞與放射線物質，如
(
3
H)-methyl thy-
midine
或
125
I-iododeoxyuridine
之結合量，
並以細胞中放射線每分鐘衰變率
(disintegra-
tions per minute, DPM)
之比值來表示
(30, 40)
，
其陽性判定標準為
SI ≥ 3
；
(2) DA
法
(
由
Daicel Chemical Industries, Ltd.
建立，簡稱
DA)
，主要是利用冷光試劑套組
(luciferin/
luciferase)
偵測增生細胞中
ATP
含量
(31)
，
並以相對冷光單位
(relative luminescence
units, RLU)
之比值來表示，其陽性判定標準
為
SI ≥ 1.8
；
(3)
溴化去氧尿苷
(5-bromo-2’-
deoxyuridine, BrdU)
標定法
(OECD 442B)
(16,
32)
，為目前較被廣泛接受與使用之非放射線
物質標定法，且試驗過程較前述
2
種方法
簡單。
BrdU
為一種胸腺嘧啶的類似物，普
遍使用於偵測活體組織中增生的細胞量。
在細胞進行分裂的過程中，
BrdU
會於細胞
生長週期的
S
期被攝入，與正在進行
DNA
合成的細胞核結合，取代原有的胸腺嘧啶，
再利用
BrdU
的專一性抗體來辨識已標定
BrdU
的細胞，以達到測量增生細胞之目的，
其陽性判定標準為
SI ≥ 1.6
。由於
LLNA
測
試方法有測量判讀上較為客觀
(
可以量化數
值呈現
)
、試驗期程較短
(
約
1 wk
即可得到
結果
)
、減少試驗操作時動物之疼痛與緊迫
程度及其使用量
(
與
OECD 406
相較動物數
量可減少
50%
以上
)
等優點，使國際上多
家實驗室如美國的
Vanta Bioscience
、德國
表一、
LLNA
三種淋巴結細胞增生結果之測試方法
1)
Table 1.
Protocol and results for 3 kinds of cell proliferation tests
1)
for LLNA
Feature/Method
Radioactive labelling method
(OECD 429)
DA method
(OECD 442A)
BrdU labelling method
(OECD 442B)
Use of radioactive
substances
Yes
No
No
Experimental duration
6 days
8 days
6 days
Results presented
DPM values
RLU values BrdU labelling indices
Expression of potential
skin sensitizer
SI ≥ 3
SI ≥ 1.8
SI ≥ 1.6
1)
DA: Daicel, BrdU: 5-bromo-2’-deoxyuridine, DPM: disintegrations per minute, RLU: relative luminescence units,
SI: stimulation index.