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臺灣農藥科學 第
1
期
196
體外微核測試趨勢
經濟合作與發展組織
(Organisation for
Economic Co-operation and Development,
OECD)
於
2010
年增加細胞層次之基因毒
性測試指引—
OECD 487
體外哺乳動物細
胞微核試驗
(
In vitro
mammalian cell micro-
nucleus test)
，簡稱體外微核試驗，並繼而
在
2014
年
9
月更新，應用於檢測間期細胞
內細胞質
(cytoplasm of interphase cells)
的
微核
(micronuclei, MN)
發生，此微核可用
來評估試驗物對細胞是否有染色體斷裂性
(clastogenicity)
及
(
或
)
非整倍性
(aneugenic-
ity)
之基因毒性潛力，因微核的形成與試驗
物暴露後造成無著絲點染色體斷片
(acentric
chromosome fragments)
或細胞分裂後期
(anaphase)
染色體因紡錘體損傷而無法被分
配到兩極所致有關。此技術的優勢有
(1)
研
究人員可在間期細胞
(interphase cells)
，觀
察細胞是否有經過分裂階段及有多少細胞
含有微核，使得在計數方面相對快速、容易
辨識及可自動化，相對於
OECD 473
體外哺
乳動物染色體畸變試驗
(
In vitro
mammalian
chromosome aberration test)
，簡稱體外染色
體畸變試驗，只能於中期細胞
(metaphase
cells)
計數各染色體結構的變化；
(2)
同樣以
顯微鏡觀測，本試驗觀測點簡易且快速可
計算每個濃度達
2,000
個細胞，與體外染色
體畸變試驗觀測點繁瑣且只計算每個濃度
300
個細胞，增加了試驗的精確性；
(3)
本
試驗可偵測結構性的染色體變異
(structural
chromosomal aberrations)
與非整倍性的染色
體變異等兩種變異性，而體外染色體畸變試
驗不易偵測非整倍性的染色體變異
(33, 34)
。
然而體外細胞微核試驗也有其缺點，包含
微核的產生需透過細胞分裂方式及試驗的
過程若添加細胞鬆弛素
B (cytochalasin B,
cytoB)
，可能會干擾其他胞質分裂抑制劑
(inhibitors of cytokinesis)
及非整倍誘發劑
(aneugens)
之作用或因
cytoB
本身的毒性使
部分細胞株產生變化
(
如複製率降低等
)
。
因此，在
2012
年已有報告指出，不建議使
用
L5178Y
細胞時添加
cytoB
，顯示會造成
細胞毒性而使細胞複製率降低，故在選用
試驗體系時需多方考量後再行之
(12, 14)
。
目前體外微核試驗的分析技術方法種
類多，包含可添加細胞鬆弛素
B (cytochala-
sin B, cytoB)
之胞質分裂阻斷微核法
(cyto-
kinesis-block micronucelus assay, CBMN) (
圖
一
)
、不添加
cytoB
之細胞微核法、著絲點
免疫化學標定法
(immunochemical labelling
of kinetochories)
、著絲粒／端粒探針雜合法
[hybridization with centromeric/telomeric
，如
運用螢光原位雜合技術
(fluorescence in situ
hybridization, FISH)]
、 微 盤
(microwell)
分
析法或流式細胞儀
(flow cytometry)
等
6
種
分析法
(1, 9, 19)
。截至目前於國家生技資訊中
心
(National Center for Biotechnology Infor-
mation, NCBI)
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很廣，如農藥、人體健康評估、醫藥、化
學品、奈米物質、煙草、食品、化妝品、
重金屬及中草藥等。許多國家及國際組織
已完成體外微核試驗相關驗證並將之納入